Produksyon ug biokemikal nga kinaiya sa oyster mushroom laccase NRC 620 ug ebalwasyon sa kaepektibo niini sa pagklaro sa duga sa mansanas.

Human sa 25 ka adlaw nga static incubation sa 28°C, ang laccase gikan sa *Pleurotus ostreatus* NRC620 nagpakita sa pinakataas nga kalihokan sa fungal culture medium. Ang labing maayo nga pH ug temperatura nga mga kantidad para niini nga enzyme kay 3.0 ug 70°C, matag usa. Human sa 2 ka oras nga incubation sa 40°C ug 50°C, ang enzyme activity nagpabilin sa 68.33% ug 59.61%, matag usa. Human sa 2 ka oras nga incubation sa citrate-phosphate buffer (pH 7.0), ang enzyme activity nagpabilin sa 100%. Ang pagdugang sa 10 mM MgSO₄ ug CuSO₄ nagdugang sa enzyme activity sa gibana-bana nga 21% ug 35%, matag usa, samtang ang NaCl, MnCl₂, KCl, ug CaCl₂ nagpugong sa enzyme activity. Gamit ang ABTS isip substrate, ang kinetic parameters (Km ug Vmax) sa *Pleurotus ostreatus* NRC 620 laccase kay 1.99 mM ug 16,217 μmol min−1 L−1, matag usa. Ang enzymatic treatment sa mga sample sa apple juice mikunhod pag-ayo sa pH ug viscosity, ug kini nga pagkunhod nakig-uban sa pagtaas sa oras sa pagtipig. Ang pagtambal sa laccase miresulta sa gamay nga pagkunhod sa kinatibuk-ang phenolic content sa apple juice, apan walay nakitang pagkunhod sa antioxidant activity.
Sa bag-ohay nga mga tuig, ang mga tigdukiduki nagpokus sa aplikasyon sa berde nga bioteknolohiya sa industriya sa pagkaon. Ang Laccase usa sa labing mapuslanon nga mga enzyme sa industriya sa pagkaon, nga nakakaplag mga aplikasyon sa mga lugar sama sa pagproseso sa duga, pagluto, pagpalig-on sa bino, ug pagpaayo sa organoleptikong mga kalidad sa mga produkto sa pagkaon.¹Daghang mas taas nga tanom ug mga mikroorganismo ang nagpagawas ug laccase,²ug ang mga fungi sama sa deuteromycetes, ascomycetes, ug basidiomycetes mahimo usab nga makahimo og laccase.³Ang Laccase (EC 1.10.3.2) usa ka blue oxidase nga nagpakunhod sa molecular oxygen ngadto sa tubig gamit ang usa ka sistema nga gilangkoban sa tulo ka lain-laing mga atomo sa tumbaga, sa ingon nag-oxidize sa lain-laing mga phenolic compound ug aromatic amines. Atol sa paghimo sa mga duga sa prutas ug utanon, ang enzymatic ug nonenzymatic browning mga kritikal nga isyu.⁴Tungod kay kini nga mga substansiya negatibo nga makaapekto sa kolor, lami, ug kahumot sa duga, kinahanglan kini tangtangon.⁵
Sa tanang prutas, ang mansanas mao ang pinakadaghang gikonsumo sa tibuok kalibutan ug sa European Union. Niadtong 2019, ang produksiyon sa mansanas naa sa ikatulong pwesto sa tibuok kalibutan, nga milapas sa 87 milyon ka tonelada.⁶Ang mga mansanas adunay daghang phenolic compounds, lakip ang mga flavonoid ug phenolic acids sama sa caffeic acid ug chlorogenic acid.⁷Tungod kay ang duga sa mansanas kasagarang kan-on sa tin-aw nga porma niini, gibana-bana nga 50% hangtod 90% sa mga sangkap nga phenolic ang mawala atol sa proseso sa pagsala.⁸Karon, ang mga konsumidor mas mopili og mga produkto nga gamay ra ang proseso, sama sa cloudy apple juice nga taas og polyphenol content. Apan, tungod sa taas nga phenolic content niini, kini nga klase sa apple juice dali ra kaayong mausab ang kolor ug moitom.⁹Nagkalain-laing mga teknolohiya, lakip ang mga pamaagi sa heat treatment sama sa pasteurization sa 60–90°C, gigamit aron makunhuran o mapugngan ang pag-itom sa duga sa mansanas.¹⁰Apan, sumala sa panukiduki ni Sauceda-Gálvez¹¹, ang thermal processing makaguba sa dali moalisngaw nga mga kemikal ug makaapekto sa organoleptic nga kalidad sa apple juice. Ang mga alternatibo sa mga pamaagi sa thermal processing naglakip sa supercritical carbon dioxide, ultraviolet radiation, ultrasound, high hydrostatic pressure, o high-pressure homogenization.¹²Ang kaepektibo niining mga teknolohiya ug ang abot sa angay nga mga duga sa prutas nagdepende sa mga parametro nga gigamit ug mga kinaiya sa produkto. Ang ilang kaylap nga paggamit limitado sa taas nga gasto, dili maayong epekto sa kalidad sa pipila ka mga produkto sa pagkaon, o dili igo nga pag-inactivate sa enzyme.^13,14
Ang Laccase magamit aron mapalig-on ug maklaro ang duga sa prutas.¹⁵Gökmen et al.¹⁶girekomenda ang paggamit sa laccase para sa pagklaro sa duga sa prutas tungod kay epektibo kini nga nagtangtang sa mga phenolic compound pinaagi sa pag-convert niini ngadto sa mga polymer o oligomer nga dali nga matangtang sa bisan unsang ultrafiltration membrane, nga nagtugot sa duga sa mansanas nga magpabilin nga lig-on ang kolor ug katin-aw hangtod sa unom ka semana sa 50°C. Ang giputli nga *Trichoderma* laccase gi-immobilize sa mga alumina beads ug gigamit aron mapili nga matangtang ang mga off-flavor compound nga gipahinabo sa microbial contamination sa duga sa mansanas.¹⁷
Gibana-bana nga 80-90% sa mga dali moalisngaw nga sangkap sa duga sa mansanas mga ester ug aldehydes, nga naghatag ug talagsaong kahumot sa duga.¹⁸Ang laccase gikan sa *Trametes versicolor* gi-immobilize sa usa ka barato nga suporta nga hinimo gikan sa natural nga lanot gikan sa linghod nga kabhang sa lubi para sa pagklaro sa duga sa mansanas.¹⁹Ang mga nangaging pagtuon nagsusi sa pag-stabilize sa apple juice (kolor ug turbidity) gamit ang enzyme-free o immobilization methods, o inubanan sa ultrafiltration.^5,19Apan, ang epekto sa fungal laccases sa physicochemical properties sa apple juice atol sa pagtipig nagpabilin nga dili klaro. Busa, ang tumong niini nga pagtuon mao ang pag-eksperimento sa pag-imbestiga sa mga pagbag-o sa physicochemical properties, phenolic compound content, ug antioxidant activity sa apple juice human sa pagtambal gamit ang fungal laccases ug duha ka semana nga refrigerated storage. Ang mga laccases adunay abilidad sa pag-oxidize sa phenolic compounds, nga naghimo kanila nga saad nga gamiton sa lain-laing mga proseso sa industriya, lakip ang juice clarification. Kini nga pagtuon nagsusi sa mga laccases gikan sa *Pleurotus ostreatus* NRC 620, nga nagpunting sa sulundon nga mga kondisyon alang sa ilang kalihokan ug kaepektibo sa juice clarification. Samtang ang panukiduki sa oyster mushrooms (P. ostreatus NRC 620) limitado pa, ang nangaging mga pagtuon nagsusi sa mga enzyme gikan sa lain-laing mga tinubdan sa fungal, sama sa Trametes versicolor ug Ganoderma lucidum. Ang tumong niini nga pagtuon mao ang pagtimbang-timbang sa potensyal nga aplikasyon niini nga enzyme sa industriya sa pagkaon ug pagpasiugda sa talagsaon nga mga kabtangan niini, ilabina ang sulundon nga pH ug temperatura niini.
Ang 2,2′-Azooxybis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) gipalit gikan sa Sigma-Aldrich (Canada). Ang tanan nga ubang mga reagent kay analytical grade.
Ang Microbial Culture Collection Center sa National Research Center nakakuha sa nailhan nga oyster mushroom strain nga NRC620. Human sa subculture, kini nga strain gitipigan sa potato dextrose agar slants sa 4°C. Ang pamaagi sa pag-andam sa inoculum mao ang mosunod: Ang 10 ka adlaw nga edad, hingpit nga naugmad nga mycelium gi-inoculate sa potato dextrose agar plates ug gi-incubate sa 28°C. Pagkahuman sa 10 ka adlaw, tulo ka 12-mm-diameter nga mycelial blocks ang gikuha gikan sa agar media gamit ang sterile metal punch ug gibutang sa 250-mL nga Erlenmeyer flasks nga adunay cotton plugs nga adunay 50 mL nga sterilized culture medium (pH 5.0, sama sa gihulagway kaniadto ni Othman et al.²⁰). Ang mga kultura gi-incubate sa 28°C sulod sa 18 ka adlaw. Ang mga kultura gisala dayon gamit ang Whatman No. 1 filter paper, ug ang resulta nga supernatant nagsilbing tinubdan sa enzyme.
Ang aktibidad sa Laccase gitino gamit ang ABTS isip substrate. Ang sagol nga reaksyon (2 mL) adunay sulod nga 500 μL nga 0.3 mM ABTS (gitunaw sa 0.1 M sodium citrate buffer, pH 4.5) ug ang gikinahanglan nga gidaghanon sa sample sa enzyme nga gitunaw sa distilled water.^21,22Tungod kay ang laccase maka-oxidize sa ABTS sa temperatura sa kwarto (28 °C ± 2), ang ABTS oxidation gitino pinaagi sa pagsukod sa pagtaas sa absorbance sa 420 nm (ε₄₂₀= 36,000 sentimetros^-1 M ^-1) gamit ang Agilent Carry-100 UV spectrophotometer. Usa ka unit sa laccase activity ang gikinahanglan aron ma-oxidize ang 1 μmol ABTS kada minuto. Ang konsentrasyon sa protina gitino pinaagi sa Bradford method gamit ang bovine serum albumin isip internal control.^23,24
Human makuha ang enzyme gikan sa oyster mushroom strain nga NRC 620, ang kalihokan niini gisukod sa lain-laing mga interval sa pagtanom sulod sa 25 ka adlaw ubos sa static nga mga kondisyon sa 28 °C.
Aron tun-an ang epekto sa temperatura sa kalihokan sa laccase, gihimo ang mga eksperimento sa temperatura nga gikan sa 20 hangtod 90 °C. Sa wala pa idugang ang enzyme ug sugdan ang reaksyon, ang buffer (0.1 M sodium citrate, pH 4.5) ug substrate (ABTS) gisagol ug gi-incubate sulod sa 5 ka minuto sa lainlaing mga temperatura. Ang thermal stability sa enzyme gisusi pinaagi sa incubation sa 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 7.0) sa 40, 50, 60, ug 70 °C sulod sa 2 ka oras, matag usa. Ang nahabilin nga kalihokan gisusi dayon gamit ang ABTS substrate.
Ang epekto sa pH sa laccase activity gisusi gamit ang ABTS isip substrate sa 0.1 M citrate-phosphate buffers nga adunay pH range nga 2.5 hangtod 7.0. Ang enzyme solution gi-incubate sa 40°C sulod sa duha ka oras sa 0.1 M citrate ug Tris buffers (pH 3, 4, 6, ug 7) aron masusi ang pH stability. Ang residual activity gamit ang ABTS isip substrate gikalkulo human sa incubation.
Ang laccase gi-incubate sulod sa 10 minutos sa sodium phosphate buffer (0.05 M, pH 7.0) nga adunay lain-laing metal ions (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, ug Mn2+) sa konsentrasyon nga 2.5 mM ug 10 mM, matag usa. Ang substrate (ABTS) gidugang dayon aron masugdan ang reaksyon, ug gisusi ang relatibong kalihokan.
Ang oksihenasyon sa ABTS pinaagi sa laccase sa lain-laing konsentrasyon (0.025–3 mM) gisukod sa pH 4.5 aron mahibal-an ang kinetic parameters (Vmax ug Km). Ang kinetic^{mga konstante}sa Michaelis-Menten equation gikalkulo gamit ang Lineweaver-Burk plot, nga nag-plot sa reciprocal sa reaction rate isip function sa substrate concentration. Ang kinetic constants gikalkulo gikan sa Lineweaver-Burk plot gamit ang GraphPad Prism version 6.01 software.
Human sa hingpit nga paghugas sa mga mansanas gamit ang tubig gikan sa gripo, kini gitunga ug gipuga gamit ang usa ka hingpit nga awtomatik nga Braun MP80 apple juicer (gihimo sa Germany). Ang duga gisala pinaagi sa upat ka lut-od sa cheesecloth. Walay mga enzyme nga gidugang sa control group, samtang ang 2.0% laccase (ang labing epektibo nga konsentrasyon nga gisulayan) gidugang sa bag-ong giandam nga duga sa mansanas, nga dayon gitipigan sa 4°C sulod sa duha ka semana.
Ang titratable acidity (TA) ug pH gitino sumala sa pamaagi ni Boulton et al.^al.27Ang pH sa matag sample gisukod gamit ang digital pH meter (JENWAY 3510 pH meter). Ang titratable acidity (TA) gikalkulo base sa malic acid gamit ang mosunod nga pormula.
Diin ang V ug C mao ang volume (mL) ug concentration (0.1 mol/L) sa sodium hydroxide solution nga gigamit sa titration, matag usa. Ang K mao ang malic acid conversion coefficient, katumbas sa 0.067, ug ang W mao ang mass (g) sa apple juice.
Ang kinatibuk-ang matunaw nga mga solido (^{Mga TDS}) ang sulod sa tanang sample sa duga gitino gamit ang PAL-1 pocket refractometer (ATAGO, Tokyo, Japan). Human sa matag sukod, ang optical lens gihugasan gamit ang deionized nga tubig, ug ang matag sample sa duga sa mansanas gisulayan sa tulo ka beses. Ang bili sa matag sample gikalkulo pinaagi sa pag-average sa tulo ka sukod. Ang mean ± standard deviation alang sa matag sample sa duga sa mansanas gikalkulo usab pinaagi sa pag-average niini nga mga resulta.
Ang viscoelasticity sa mga sample sa apple juice gisusi gamit ang rotational viscometer (RV, Rheotest 2, Germany). Ang sample gibutang sa sulod sa “S2″ cylinder sa viscometer. Ang apparent viscosity girepresentahan sa slope sa shear stress versus shear rate curve, nga gikalkulo gikan sa shear stress ug sa katugbang nga mga kurba sa lain-laing shear rates (gikan sa 1.00 ngadto sa 437.4 s⁻¹). Ang pormula sa pagkalkulo sa apparent viscosity mao ang mosunod:
Diin ang η mao ang apparent viscosity (cP), ang τ mao ang shear stress (dyn/cm²), ang γ mao ang shear rate (sec⁻¹), ug ang (τ) gikalkulo gamit ang torque (α) ug cylinder (Z) values ​​​​gamit ang mosunod nga pormula: τ = Z. α.
Ang browning index gitino sumala sa pamaagi sa Meidav ​​​​et^al.29Usa ka 10-ml nga sample sa duga ang gi-centrifuge sa 2750 xg sulod sa 10 minutos. 5 ml sa juice supernatant ang gisagol sa 5 ml nga 95% ethanol. Ang absorbance sa sagol gisukod sa 420 nm gamit ang Shimadzu UV spectrophotometer (UV-1601 PC).
Ang total phenolic content (TPC) gitino pinaagi sa kolorimetriko gamit ang Folin-Ciocalteu reagent sama sa gihulagway ni Boulton et al.^[27]Usa ka standard nga kurba sa gallic acid ang gihimo para sa mga konsentrasyon gikan sa 0 hangtod 500 mg/L (^r²= 0.997). Ang mga resulta gipahayag isip katumbas sa gallic acid (mg GAE/mL).
Idugang ang 125 μL nga distilled water ug 2850 μL nga FRAP solution sa 25 μL nga apple juice ug ibilin ang sagol sa kangitngit sulod sa³⁰min. Dayon sukda ang absorbance sa 593 nm gamit ang Shimadzu UV spectrophotometer (UV-1601 PC). Ang FRAP reagent giandam pinaagi sa pagsagol sa 300 mM acetate buffer (pH 3.6), 20 mM iron(III) chloride, ug 10 mM 2,4,6-tris(2-pyridyl)triazine (TPTZ) (gitunaw sa 40 mM HCl) sa ratio nga 10:1:1. Usa ka standard curve ang gihimo gamit ang Trolox isip standard (^R²= 0.999), ug ang mga resulta gipahayag isip μM Trolox/mL.
Ang antioxidant nga kalihokan sa mga duga nga gitambalan ug wala gitambalan gitino gamit ang pamaagi sa DPPH aron masusi ang ilang abilidad sa pagsuhop sa mga free radical sa DPPH.³¹Napulo ka microliters nga duga ang gisagol sa 1 ml nga DPPH solution (100 μM) sa methanol. Human sa reaksyon sa kangitngit sulod sa 30 minutos, ang absorbance sa sagol gisukod sa 517 nm gamit ang Shimadzu UV spectrophotometer (UV-1601 PC). Ang mga resulta gipahayag isip trolox equivalents (μM trolox/ml) base sa calibration curve (_^R2= 0.990).
Ang datos nga nakuha nagpakita nga ang pinakataas nga produksiyon sa laccase naobserbahan sa NRC 620 oyster mushrooms sa katapusan sa ika-18 nga adlaw sa fermentation, nga nakaabot sa kalihokan nga 1302 U/L. Kini nagsilbing basehan sa pagtino sa labing maayo nga oras sa pagtanom alang sa produksiyon sa laccase (Figure 1). Bisan kung ang produksiyon sa enzyme misaka uban sa pagtaas sa oras sa pagtanom, ang rate sa pagtaas dili direkta nga proporsyonal sa oras sa pagtanom; pagkahuman sa 21 ka adlaw, ang kalihokan sa enzyme misaka lamang sa 90 U/L (ngadto sa 1390 U/L). Busa, 18 ka adlaw ang napili isip labing maayo nga oras sa pagtanom aron mabalanse ang ani sa produkto uban sa mga benepisyo sa ekonomiya sa dugang nga oras sa pagtanom.
Epekto sa oras sa pagtanom sa ani sa laccase sa Pleurotus ostreatus NRC 620. Tulo (12 mm) ka fungal mycelial blocks ang gi-inoculate sa 50 ml nga sterile medium ug dayon gi-culture sa 28 °C sa lain-laing mga oras.
Nahiuyon sa ubang mga pagtuon, ang among mga resulta nagpakita nga ang sulundon nga panahon sa pag-kultura aron makab-ot ang kinatas-ang laccase secretion sa fungi lagmit nga tali sa 7 ug 36 ka adlaw.³²Sumala ni Ezike et al.³³, *Trametes polyzona* Ang WRF03 nakamugna sa pinakataas nga gidaghanon sa laccase sa katapusan sa ikasiyam nga adlaw sa fermentation, nga adunay espesipikong kalihokan nga 1637 U/mg nga protina. Dugang pa, si Othman et al.³⁴nakit-an nga ang *Trichoderma harzianum* S7113 nagpagawas ug daghang laccase sa ikalimang adlaw sa pag-kultura. Ang gikusgon sa produksiyon sa laccase nakaabot sa kinatas-ang kalihokan sa ikanapulog-upat nga adlaw ug dayon anam-anam nga mikunhod.³⁴Bisan tuod ang pagpagawas sa enzyme mahimo usab nga mahitabo sa panahon sa pangunang hugna sa pagtubo, kini kasagaran motaas sa kinatas-ang bahin sa tunga-tunga nga hugna ug mapalihok sa pagkonsumo sa tinubdan sa carbon o nitroheno.^34,35
Bisan tuod ang laccase gikan sa Pleurotus ostreatus NRC 620 nagpakita og taas nga kalihokan sa halapad nga range sa temperatura gikan sa 50°C ngadto sa 80°C, nga hapit na moabot sa peak activity (69–98%), ang pinakataas nga kalihokan niini naobserbahan sa 70°C (Fig. 2a). Gawas niini nga range sa temperatura, ang kalihokan sa enzyme mikunhod sa gibana-bana nga 70°C. Kini nga mga resulta nagsugyot nga ang enzyme aktibo sa taas nga temperatura, lagmit tungod kay ang taas nga temperatura nagdugang sa kinetic energy sa reaksyon.
Epekto sa temperatura sa reaksyon (a) ug pH (b) sa kalihokan sa laccase sa *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Ang mga temperatura gikan sa 20 hangtod 90 °C nakab-ot pinaagi sa pag-pre-incubate sa sagol sa lainlaing temperatura sulod sa 5 minuto sa dili pa idugang ang enzyme ug sugdan ang reaksyon. Ang epekto sa pH sa kalihokan sa laccase gisusi gamit ang ABTS isip substrate sa mga solusyon nga adunay 0.1 M citrate-phosphate buffer sa pH range nga 2.5 hangtod 7.0.
Sumala ni Ezike ug^al.33, ang labing maayong temperatura para sa *Trametes polyzona* WRF03 laccase kay 55 °C, nga parehas sa para sa *Ganoderma lucidum*^laccase36ug susama sa labing maayong temperatura (50 °C) para sa *Trametes polyzona* KU-RNW02737^laccase . ^Baldrian38nag-ingon nga, sama sa ubang mga sistema sa enzyme nga makaguba sa lignin, ang sulundon nga range sa temperatura para sa laccase kay tali sa 50 ug 70 °C.
Ang mga resulta nagpakita nga ang enzyme nagpakita sa pinakataas nga kalihokan sa pH 3.0, nga nakaabot sa 94% nga kalihokan sa pH 3.5. Bisan pa, kini nagpabilin nga aktibo sa halapad nga pH range gikan sa 2.5 hangtod 7.0 (Figure 2b). Dugang pa, kini nagpakita sa mas taas nga kalihokan sa acidic nga mga kondisyon kon itandi sa neutral o alkaline nga mga kondisyon. Ang kalihokan niini nagpabilin nga labing menos 77% sa pH range gikan sa 2.5 hangtod 4.5, apan nakaabot lamang sa gibana-bana nga 38% sa pH 7.0. Ang labing maayo nga pH para sa laccase gikan sa *Trametes polyzona* WRF03 kay 4.533, nga parehas sa pH para sa mga laccase gikan sa *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, ug *Trametes hirsuta* 41. Bisan pa, sumala sa pagtuon ni Chairin et al.⁴², ang labing maayo nga pH para sa laccase gikan sa *Polymorpha f. sp.* WR710-1 kay 2.2, samtang ang labing maayo nga pH para sa laccase gikan sa *Polymorpha f. sp.* IBL-04 kay 5.043. Ang pagbugkos sa hydroxide anions (laccase inhibitor) sa mga atomo sa tumbaga sa T2/T3 laccase mahimong hinungdan sa pagkunhod sa kalihokan sa laccase ubos sa neutral o alkaline nga mga kondisyon sa pH. Mahimo kini nga makabalda sa internal nga pagbalhin sa electron gikan sa sentro sa T1 ngadto sa sentro sa T2/T3, sa ingon^naglimiteang kalihokan sa enzyme23,44
Pinaagi sa pag-incubate sa enzyme sa lain-laing temperatura, nakita nga ang oras sa pag-incubate ug temperatura nakaapekto sa kalig-on sa enzyme. Ilabi na, ang laccase gikan sa *Trametes polyzona* NRC 620 nagpakita og mas taas nga kalig-on sa 40℃ ug 50℃, nga nagpabilin sa 68.33% ug 59.61% sa inisyal nga kalihokan niini, matag usa, human sa 120 ka minuto (Figure 3a). Sa kasukwahi, ubos sa parehas nga mga kondisyon (40℃ ug 50℃, 120 ka minuto), ang laccase gikan sa *Trametes polyzona* WRF03 nagpabilin sa 64.38% ug 42.92% sa kalihokan niini, matag usa.³³Sa kasukwahi, ang pagtaas sa oras ug temperatura sa inkubasyon nakapakunhod sa kalig-on sa *Trametes polyzona* NRC 620 laccase; Human sa inkubasyon sa 60℃ ug 70℃ sulod sa 60 minutos, ang kalihokan niini mikunhod ngadto sa 39.24% ug 1.72%, matag usa (Figure 3a). Subay sa mga resulta sa eksperimento, ang laccase gikan sa *Trametes polyzona* WRF03 nagpakita og mas taas nga kalig-on sa 40 ug 50℃ sa tibuok proseso sa thermal treatment.³³Susama, si Lueangjaroenkit ug uban pa^al.37ug Chairin et al.^al.42nagtaho sa kalig-on sa mga laccase gikan sa Trametes polyzona KURNW027 ug Trametes polyzona WR710-1 sa 50 °C sulod sa 1 ka oras, matag usa. Isip usa ka mapuslanong biocatalyst nga magamit sa nagkalain-laing natad sa biotechnological, ang laccase kinahanglan nga adunay maayong kalig-on ug performance sa halapad nga range sa temperatura.
Ang kalig-on sa thermostatic (a) ug kalig-on sa pH (b) sa laccase gikan sa *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Ang kalig-on sa thermostatic gisusi pinaagi sa pag-incubate sa enzyme solution sa 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 7.0) sa 40, 50, 60, ug 70 °C sulod sa 2 ka oras, matag usa. Ang kalig-on sa pH gisusi pinaagi sa pag-incubate sa enzyme solution sa 0.1 M citrate buffer ug Tris buffer (pH 3, 4, 6, ug 7) sa 40 °C sulod sa 2 ka oras. Ang nahabilin nga kalihokan gikalkulo gamit ang ABTS isip substrate human sa incubation.
Aron mahibal-an ang labing maayo nga mga kondisyon alang sa paggamit ug pagtipig sa enzyme, among gisusi ang epekto sa pH sa kalig-on sa laccase. Ang pagkaladlad sa lainlaing mga kantidad sa pH nakaimpluwensya pag-ayo sa kalig-on sa istruktura sa protina, sa ingon nakaimpluwensya sa kalig-on ug kalihokan sa molekula sa enzyme. Ang mga resulta nagpakita nga ang enzyme dili kaayo lig-on ubos sa mga kondisyon sa acidic, samtang kini nagpakita og mas maayo nga kalig-on sa mas taas nga mga kantidad sa pH (neutral ug alkaline nga mga rehiyon). Sa mga kantidad sa pH nga 7.0, 6.0, 4.0, ug 3.0, ang mga rate sa pagpabilin sa enzyme pagkahuman sa 120 minuto gibana-bana nga 100%, 62.54%, 52.39%, ug 11.14%, matag usa (Fig. 3b). Ang *Strombus multisus* WRF03 laccase nagpakita og mas taas nga kalig-on sa neutral nga mga kantidad sa pH (5.5–6.5) ug mas ubos nga kalig-on sa acidic nga mga kantidad sa pH (ubos sa 4.0). Human sa 120 minutos sa pH nga 5.5, 6.0, ug 6.5, ang enzyme retention rates miabot og gibana-bana nga 82%, 100%, ug 93%, matag usa.³³Khairin ug uban pa.⁴²namatikdan nga ang laccase gikan sa Trametes polyzona WR710-1 lig-on sa pH range nga 6.0 hangtod 7.0, samtang si Sayed et al.⁴⁵nagpakita nga ang laccase mas lig-on ubos sa neyutral nga mga kondisyon sa pH. Bisan pa, ang laccase gikan sa Cerrena unicolor nagpakita usab og kalig-on ubos sa alkaline nga mga kondisyon (pH 9.0)⁴⁶Ang mga laccase nga gitun-an nagpakita og taas nga kalig-on sa halapad nga pH range. Mahimo kini nga usa ka importante nga kinaiya alang sa mga aplikasyon sa industriya.
Tungod kay ang ubang mga metal ion adunay parehong stimulatory ug inhibitory nga mga epekto sa kalihokan sa enzyme, ang ilang mga epekto sa kalihokan sa enzyme kinahanglan nga tagdon sa mga aplikasyon sa industriya. Kini hinungdanon tungod kay ang mga metal ion komon nga mga hugaw sa kalikopan nga makaapekto sa kalig-on ug sintesis sa mga extracellular enzyme.⁴⁷Aron imbestigahan ang mga epekto sa daghang metal ions sa laccase gikan sa *Pleurotus ostreatus* NRC 620, nagpahigayon kami og katugbang nga mga eksperimento. Sama sa gipakita sa Figure 4, depende sa klase sa metal nga gigamit, ang pagpataas sa konsentrasyon sa metal ion gikan sa 2.5 mM ngadto sa 10 mM negatibo nga nakaapekto sa function sa enzyme. Pananglitan,^Mg²⁺ , ^Co²⁺ , ^Zn²⁺, ug^Cu²⁺mahimong makapadasig ug maka-aktibo sa kalihokan sa enzyme, samtang^Na⁺ , ^Mn²⁺ , ^Ca²⁺, ug^K⁺mahimong makapugong sa kalihokan sa enzyme. Sa konsentrasyon nga 10 mM, ang mga Cu²⁺ ug Mg²⁺ ion mao ang labing kusgan nga mga activator sa kalihokan sa laccase gikan sa *Pleurotus ostreatus* NRC 620, nga naghatag og activation degree nga gibana-bana nga 34% ug 20%, matag usa. Bisan pa, sa konsentrasyon nga 10 mM, ang mga Ca²⁺ ion mao ang labing kusgan nga inhibitor sa laccase, nga nagpamenos sa kalihokan sa enzyme sa gibana-bana nga 60%.
Ang epekto sa mga metal ion sa kalihokan sa Pleurotus ostreatus NRC 620 laccase. Ang laccase gi-incubate sulod sa 10 ka minuto sa sodium phosphate buffer (0.05 M, pH 7.0) nga adunay lain-laing mga metal ion sa konsentrasyon nga 2.5 mM ug 10 mM. Ang reaksyon gisugdan dayon pinaagi sa pagdugang sa substrate (ABTS), pagkahuman gisukod ang relatibong kalihokan.
Ang among mga resulta nahiuyon sa ubang mga awtor nga nakakaplag nga ang Mg²⁺ ug Cu²⁺ nagpalambo sa kalihokan sa *Trametes polyzona* WRF03³. Nakita ni Castaño et al.⁴⁸ nga ang laccase gikan sa *Xylaria* sp. gi-stimulate sa pipila ka sukod sa mga copper ion (Cu²⁺). Dugang pa, si Foroutanfar et al.⁴⁹ ug Si et al.⁵⁰ nagpahigayon og susamang mga pagtuon sa mga laccase gikan sa *Paraconiothyrium variabile* ug *Trametes pubescens*, matag usa. Ang type II copper-binding site (T2) niini nga enzyme mahimong saturated sa Cu²⁺ sa usa ka gihatag nga konsentrasyon, nga mahimong makapasabut sa pag-stimulate sa kalihokan sa laccase sa mas taas nga konsentrasyon sa Cu²⁺³⁹. Tungod kay ang mga laccase sa white rot fungi kay mga oxidase nga adunay daghang atomo sa tumbaga, ang mga epekto sa mga ion sa tumbaga sa kalihokan sa laccase lainlain ug gikan sa stimulatory ug inhibitory ngadto sa neutral.⁵¹ Sa kasukwahi, si Zhou et al.^{. [52]}gitaho nga^Cu²⁺nagpugong sa kalihokan sa laccase sa anay sa ilalom sa yuta sa Taiwan (Odontotermes formosanus). Apan, ang mga laccase sa Cerena sp. HYB07^[53]ug Clitocybe maxima^[54]wala maapektuhan sa mga copper ion.
Ang substrate specificity girepresentahan sa kinetic parameters niini (Km ug Vmax); kon mas kusog ang binding affinity sa substrate sa enzyme, mas ubos ang Km value ug mas taas ang substrate specificity.^3,21,55Ang kinetic parameters (Km ug Vmax) sa laccase gikan sa *Pleurotus ostreatus* NRC 620 gitino gamit ang GraphPad Prism 6.0 software pinaagi sa pag-plot sa Lineweaver-Burk plot (Figure 5). Sa paggamit sa ABTS isip substrate, ang mga resulta kay 1.99 mM ug 16217 μmol.^{min⁻¹ L⁻¹,}matag usa. Elsayed et al.²¹nagtaho nga ang mga kantidad sa Km para sa oksihenasyon sa ABTS kay 0.1 mM ug 0.064 mM, matag usa, nga nagpakita sa taas nga affinity sa Lac A ug Lac B isoenzymes para sa ABTS. Dugang pa, ang mga kantidad sa Vmax kay 0.182 μmol.^min⁻¹ug 0.603 μmol^min⁻¹, matag usa. Ang nakuha nga kantidad sa Km mas ubos kaysa sa Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM); dugang pa, ang ilang kantidad sa Vmax (1429 mmol min⁻¹) usab^ubossa paggamit sa ABTS isip substrate.33 Susama, ang mga kantidad sa Km sa Lentinus squarrosulus MR13 ug Trametes sp. AH28-2 laccase concentrations kay 0.0714 mM ug 0.025 mM, matag usa, ug ang mga kantidad sa Vmax kay 0.0091 mM min−1 ug 0.67 mM min−1 mg−1 (kon itandi sa ABTS)^{, matag usa.56,57}
Gisusi ang epekto sa konsentrasyon sa ABTS sa kalihokan sa laccase gikan sa *Pleurotus ostreatus* NRC 620, ug usa ka Lineweaver-Burk plot sa resiprokal sa inisyal nga katulin sa reaksyon batok sa konsentrasyon sa ABTS ang giplot. Ang reaksyon sa oksihenasyon sa ABTS nga adunay lainlaing mga konsentrasyon (0.025–3.0 mM) sa laccase gisukod sa pH 4.5 aron mahibal-an ang mga kinetic parameter (Vmax ug Km). Ang mga Michaelis-Menten kinetic constants gikalkulo gamit ang Lineweaver-Burk plot sa resiprokal sa katulin sa reaksyon batok sa konsentrasyon sa substrate. Ang mga kinetic constants gikalkulo gikan sa Lineweaver-Burk plot gamit ang GraphPad Prism 6.01 software.
Ang tradisyonal nga mga enzyme nga pangklaro, sama sa mga pectinase, nag-hydrolyze sa mga pectic substance, nga nagpamenos sa viscosity ug turbidity. Epektibo nilang gibungkag ang mga structural polysaccharides ug kanunay gigamit inubanan sa ubang mga enzyme, sama sa cellulases ug hemicellulases, aron mapaayo ang ani ug katin-aw. Bisan pa, ang mga pectinase wala mag-target sa mga phenolic compound, nga mao ang mga nag-unang hinungdan sa turbidity ug oxidative browning, labi na sa mga juice sama sa apple ug grape juice.⁵⁸Sa kasukwahi, ang mga laccase nag-catalyze sa oksihenasyon sa mga phenolic compound, nga nag-polymerize niini ngadto sa mas dagko, dili matunaw nga mga molekula nga mahimong makuha pinaagi sa sedimentation o filtration. Kini nga mekanismo dili lamang makapauswag sa katin-aw apan makapalugway usab sa shelf life sa juice pinaagi sa pagpakunhod sa posibilidad sa oxidative browning nga gipahinabo sa mga phenolic compound. Dugang pa, ang mga proseso sa clarification nga nakabase sa laccase mahimong ipahigayon ubos sa malumo nga mga kondisyon sa pagproseso (pH 3.5–5.5, temperatura 25–40 °C), nga naghimo kanila nga angay alang sa delikado nga mga juice nga dili ikompromiso ang ilang nutritional o organoleptic nga mga kabtangan.⁵⁹Gipakita sa mga pagtuon nga ang pagtambal sa pectinase makapaklaro sa duga sulod sa 1-2 ka oras, samtang ang pagtambal sa laccase kasagaran nagkinahanglan og mas taas nga oras sa reaksyon (3-6 ka oras) aron hingpit nga makunhuran ang mga phenolic compound. Bisan pa, kini nga proseso mahimong ma-optimize pinaagi sa pag-immobilize sa enzyme o pinaagi sa paghiusa sa laccase sa mga mekanikal nga pamaagi sa pagklaro.⁶⁰Niini nga pagtuon, ang enzyme profiling sa krudo nga kinuha nagpakita og dakong laccase ug α-amylase nga mga kalihokan, samtang ang pectinase ug xylanase nga mga kalihokan ubos kaayo, ug ang cellulase nga kalihokan wala mamatikdi. Busa, ang pagkunhod sa turbidity ug phenolic content kasagaran tungod sa aksyon sa laccase, samtang ang pagbag-o sa viscosity mahimong tungod sa aksyon sa amylase.
Ang Talaan 1 nagpakita sa mga parametro sa pisiko-kemikal sa bag-ong gipuga nga duga sa mansanas ug mga sample nga gitambalan og laccase. Ang mga resulta nagpakita nga ang ani sa bag-ong gipuga nga duga sa mansanas (71.59%) mas ubos kaysa sa mga sample nga gitambalan og laccase (87.34%). Kini nga mga resulta nahiuyon sa mga nahibal-an ni Pilnik ug Orange.⁶¹, kinsa nagpakita nga ang paggamit sa mga enzyme sa pagproseso sa prutas makadugang sa ani sa duga, makapaayo sa pagsala, ug makakuha og taas nga kalidad, tin-aw nga duga para sa konsentrasyon. Ang pagtaas sa ani sa duga kasagaran tungod sa pagtaas sa sulod sa matunaw nga asukal sa duga. Atol sa enzymatic hydrolysis sa mga prutas, ang mesoglea ug pectin sa mga bungbong sa selula sa produkto malaglag ug mabag-o ngadto sa matunaw nga mga substansiya sama sa neutral nga asukal ug mga asido.^62.Ang pH value sa enzyme-treated apple juice mas ubos kay sa control group (P < 0.05), ug ang pH value sa duha ka grupo misaka pag-ayo atol sa pagtipig (Table 1). Kini nga mga resulta nahiuyon sa kang Mark et al.⁶³, kinsa nakamatikod nga ang pH sa duga sa kasoy mikunhod human sa pagtipig human sa heat treatment. Ang pagkadaot sa pectin ug ang pagporma sa galacturonic acid human sa enzyme treatment mahimong responsable sa pagtaas sa pH atol sa pagtipig. Ang pH sa mga sample nga gitambalan og enzyme nagpabilin tali sa 4.05 ug 4.31 sa tibuok pagtipig, samtang ang pH sa wala matambalan nga duga sa mansanas gikan sa 4.12 ug 4.33.
Ang total acidity (TA) sa mga sample nga wala gitambalan ug wala gitambalan og laccase nagpakita og pagkunhod uban sa pagtaas sa oras sa pagtipig (Talaan 1). Ang pagkunhod sa acidity gipahinungod sa pagkakabig sa mga organic acid ngadto sa carbohydrates o enzymatic reactions, ingon man sa oksihenasyon atol sa pagtipig sa juice.⁶⁴Ang kinatibuk-ang kaaslom sa control apple juice ug enzyme-treated samples mas ubos kay sa ubang mga juices (strawberry juice 0.9%, plum juice 2.2%, kumquat juice 1.0%, apricot juice 2.4%, orange juice 0.8%), apan susama sa ubang mga juices (pananglitan, pear juice 0.3%).⁶²Kining mga kalainan sa wala maproseso nga bag-ong gipuga nga duga sa mansanas mahimong tungod sa lainlaing mga hinungdan sama sa mga kondisyon sa pagtubo, mga hinungdan sa henetiko, lebel sa pagkahinog, ug mga pamaagi sa pagproseso.⁶⁵Ang pagkunhod sa total acidity sa control ug laccase-treated apple juice nahiuyon sa mga resulta nga gipresentar ni Singh et al.⁶⁶bahin sa pagkunhod sa kinatibuk-ang kaaslom sa duga sa mansanas sa Jin Nuo pagkahuman sa 74 ka adlaw nga pagtipig. Sa laing bahin, si Oshmiansky ug Wojdylo⁶⁷wala makakita og bisan unsang mahinungdanong pagbag-o sa kaaslom sa duga sa mansanas sa dihang gitun-an ang epekto sa tradisyonal nga mga pamaagi sa pagklaro.
Ang mga resulta nga gipakita sa Talaan 1 nagpakita nga ang total soluble solids (TSS) nga kantidad sa apple juice nga gitambalan og laccase mas taas kaysa sa wala gitambalan nga sample. Kini nga mga resulta nahiuyon sa mga gipatik nga pagtuon.^.68Dugang pa, ang Talaan 1 nagpakita nga ang TSS value sa control apple juice group kay 9.58 sa inisyal nga oras ug niabot sa 11.05 sa katapusan sa panahon sa pagtipig. Kini nga mga value mas ubos kay sa TSS values ​​sa presko nga apple juice nga gitaho ni Hamid et al.^.69(11.2 ug 11.80, matag usa). Ang kantidad sa TSS sa mga sample sa apple juice nga gitambalan og laccase misaka pag-ayo, sugod sa 11.23 ug miabot sa 12.93 human sa duha ka semana nga pagtipig sa 4°C (Talaan 1). Usa ka susamang pagtaas sa TSS atol sa pagtipig ang naobserbahan usab sa mga prutas nga citrus, lemon, ug tam-is nga kahel. Ang pagtaas sa total soluble solids (TSS) atol sa pagtipig mahimong tungod sa hydrolysis sa polysaccharides (starch) ngadto sa monosaccharides (asukal), ang pagtaas sa konsentrasyon tungod sa dehydration sa juice, ug ang pagkaguba sa pectin sa juice ngadto sa soluble solids. Ang pagtaas sa total soluble solids (TSS) lagmit tungod sa pagtaas sa soluble sugars, nga mahimong maporma pinaagi sa pagkakabig sa pectin o cellulose ngadto sa soluble sugars pinaagi sa pectin o cellulase, matag usa, o pinaagi sa hydrolysis sa starch ngadto sa asukal, sama sa gitaho ni Hamed et al.^69.Ang epekto sa laccase sa mga kinaiya sa duga sa mansanas makita sa panan-aw, tungod kay ang duga sa mansanas nga gitambalan sa laccase nagpakita og mas maayo nga pag-agos ug mas ubos nga viscosity kaysa sa wala gitambalan nga duga. Kini nga obserbasyon natala sa Talaan 1; Ang viscosity sa sample nga gitambalan sa enzyme kay 1.87 cP, samtang ang viscosity sa control sample kay 2.95 cP. Kini nga dakong pagkunhod sa viscosity lagmit tungod sa mas taas nga kapasidad sa pagpugong sa tubig sa mga substansiya nga sama sa pectin ug ang pagporma sa usa ka cohesive network structure.
Niini nga pagtuon, ang epekto sa laccase sa browning index (BI) sa apple juice gisusi pinaagi sa pagsukod sa absorbance sa 420 nm gamit ang spectrophotometer. Ang mga resulta gipakita sa Table 1. Atol sa pagtipig, ang BI sa mga sample sa apple juice sa parehong gitambalan ug wala gitambalan nga mga grupo nagpakita og hinay-hinay nga pagtaas sa trend. Ang BI nagpakita sa degree sa browning ug mahimong magsilbing^{usa ka importante}timailhan sa enzymatic ug non-enzymatic browning reactions. Ang absorbance misaka pag-ayo atol sa pagtipig (P < 0.05). Sa katapusan sa pagtipig, ang_A420Ang kantidad sa mga sample sa apple juice sa control ug enzyme-treated nga mga grupo misaka og mga 217% ug 121%, matag usa (Talaan 1). Ang mga resulta nagpakita nga ang enzyme treatment epektibong makapakunhod sa browning degree og mga 56%. Ang mga resulta ni Bezerra et al.^[19]] nahiuyon sa among mga resulta; Gigamit nila ang laccase-glutaraldehyde-coconut fiber aron klaruhon ang duga sa mansanas, nga nakakunhod sa orihinal nga kolor niini og 61%.
Bisan tuod ang mga polyphenol sa mga duga sa prutas adunay positibo nga epekto sa nutrisyon ug terapyutik sa lawas sa tawo, mahimo usab kini nga mo-react sa mga protina, nga hinungdan sa pagka-cloudy sa duga, sedimentation, o turbidity, sa ingon makausab sa lami ug kahumot sa produkto ug makapamenos sa shelf life niini.⁷¹Ang tumong niini nga pagtuon mao ang luwas nga pagpakunhod sa phenolic compound content sa apple juice gamit ang laccase gikan sa Pleurotus ostreatus NRC 620. Ang mga resulta nga gipakita sa Table 1 nagpakita nga ang total phenolic compound content sa laccase-treated apple juice mikunhod pag-ayo sa wala pa tipigi sa 4 °C. Dugang pa, ang total phenolic compound content mikunhod usab atol sa pagtipig sa duha ka sample nga gitun-an (Table 1). Panukiduki ni Sandri et al.⁷²nagpakita nga ang enzyme-treated apple juice makapadayon sa antioxidant activity ug phenolic compound content niini. Apan, ang mga resulta sa usa ka pagtuon ni Lettera et al.⁷³nagpakita nga ang pagtambal sa orange juice gamit ang fungal laccase makapakunhod sa sulod sa phenolic compounds niini hangtod sa 45%.
Ang mga phenolic compound napamatud-an nga adunay mga kabtangan sama sa free radical scavenging, singlet oxygen reduction ug quenching, hydrogen atom transfer, ug electron donation ngadto sa free radicals, nga naghimo kanila nga kusgan nga antioxidants.⁷⁴Busa, niini nga pagtuon, gigamit ang mga pamaagi nga gibase sa DPPH ug FRAP aron masusi ang epekto sa laccase sa antioxidant nga kalihokan sa duga sa mansanas nga gitipigan sa refrigerator sulod sa 14 ka adlaw (Talaan 2). Ang duha ka pamaagi nagpakita og pagtaas sa antioxidant nga kalihokan atol sa pagtipig, nga mahimong tungod sa pagtaas sa libre nga phenolic compounds o ang pagporma sa Maillard reaction products (MRPs), diin ang Maillard reaction products lagmit mao ang hinungdan sa pagtaas sa antioxidant nga kalihokan.⁷⁵Ang mga non-enzymatic browning reactions (lakip ang ascorbic acid degradation, Maillard reactions, ug acid-catalyzed degradation sa mga asukal) makamugna og brown pigments (melanoidins). Ang intermediate ascorbic acid degradation products ug sugar degradation products (sama sa carbonyl compounds) mahimong mo-react sa mga amino acid pinaagi sa Maillard reactions.⁷⁶Bisan tuod ang pag-brown sa mga prutas ug utanon atol sa pagtipig kay gitun-an na pag-ayo, ang atong pagsabot niini nga mga reaksyon nagpabilin nga limitado.⁷⁷Kon itandi sa pamaagi sa FRAP, ang duga sa mansanas nga gitambalan og laccase nagpakita og mas ubos nga antioxidant activity pinaagi sa pamaagi sa DPPH (Talaan 2), ug ang antioxidant activity sa tanang sample misaka pag-ayo uban sa pagtaas sa oras sa pagtipig. Duha ka lain-laing pamaagi sa pagtino sa antioxidant activity ang gigamit niini nga pagtuon tungod kay managlahi ang ilang mga prinsipyo. Ang pamaagi sa DPPH nagsukod sa abilidad sa pag-neutralize sa mga free radical, samtang ang pamaagi sa FRAP nagsukod sa abilidad sa pagpakunhod sa iron ions. Busa, girekomenda nga mogamit og daghang pamaagi sa pagtino sa antioxidant activity aron mas masabtan ang antioxidant activity sa mga sample nga gitun-an.⁷⁸
Usa sa mga importanteng nadiskobrehan niini nga pagtuon mao nga ang *Pleurotus ostreatus* laccase NRC 620 nagpakita sa labing maayong kalihokan sa 70°C ug pH 3.0. Kon itandi sa ubang fungal laccases nga kasagarang gigamit para sa pagklaro sa duga, sama sa *Trametes versicolor* ug *Ganoderma lucidum* laccases, ang *P. ostreatus* NRC 620 nagpakita sa mas taas nga thermal stability ug mas acidic nga pH. Ang mga laccase gikan sa *Trametes versicolor* ug *Ganoderma lucidum* kasagarang nagpakita sa labing maayong kalihokan sa range nga 50-60°C ug sa pH values ​​​​tali sa 3.5 ug 5.0. Kini nga kalainan mahimong makatampo sa mas maayo nga efficiency sa pagklaro sa duga, labi na sa mga acidic nga duga diin ang kalig-on sa mas ubos nga pH values ​​​​hinungdanon. Ang talagsaon nga kinaiya sa *P. Kon itandi sa ubang gitun-an nga fungal laccases, ang *Pleurotus ostreatus* NRC 620 nagpakita sa abilidad sa paglihok nga epektibo ubos sa mas mahagiton nga mga kondisyon. Ang mas taas nga optimal nga temperatura sa kalihokan niini nagsugyot og mga potensyal nga bentaha sa mga aplikasyon sa industriya, sama sa mas paspas nga rate sa reaksyon ug pagkunhod sa kontaminasyon sa mikrobyo. Ang ubos nga pH niini, nga angay sa acidic nga kinaiya sa daghang mga duga, mahimong mapuslanon sa mga proseso sa pagklaro sa duga. Kini nga mga resulta nagpakamatarong sa dugang nga eksplorasyon alang sa dako nga sukod nga aplikasyon, nga naghimo sa *Pleurotus ostreatus* NRC 620 nga usa ka maayong alternatibo sa tradisyonal nga mga gigikanan sa fungal laccase. Kung itandi sa nangaging mga pagtuon, among nakita nga ang labing maayo nga temperatura mao ang 60°C ug ang labing maayo nga pH mao ang 3.0. Human sa reaksyon sa 60°C sulod sa 80 ka minuto, ang *Ganoderma lucidum* laccase nagpabilin.⁴⁶% sa kalihokan niini.79 Sumala ni Kurniawati ug Nicelle⁸⁰, ang mga enzyme sa *Ganoderma lucidum* nagpakita og maayo kaayo hangtod sa kasarangan nga kalig-on sa 25°C ug mga kantidad sa pH gikan sa 5.0 hangtod 8.0, ug kalig-on sa pH 6.0 ug mga temperatura gikan sa 10 hangtod 30°C. Niini nga pagtuon, among nakita nga ang labing maayo nga pH ug temperatura alang sa kalihokan sa enzyme alang sa *Pleurotus ostreatus* kay 3.0 ug 70°C, matag usa. Human sa incubation sa 40°C ug 50°C sulod sa duha ka oras, ang enzyme nagpabilin sa 68.33% ug 59.61% sa kalihokan niini, matag usa. Dugang pa, ang Pleurotus ostreatus NRC 620 laccase nagpakita og taas nga kalihokan sa halapad nga range sa temperatura gikan sa 50°C hangtod 80°C, hapit nakaabot sa pinakataas nga kalihokan (69%–98%), nga adunay pinakataas nga kalihokan nga naobserbahan sa 70°C.
Sa konklusyon, ang oyster mushroom laccase NRC620, nga nakuha ubos sa static nga mga kondisyon, nagpakita sa labing maayo nga kalihokan ug kalig-on sa lain-laing mga kondisyon sa pH ug temperatura, nga nagpakita sa labaw nga kalig-on kon itandi sa ubang mga tinubdan sa enzyme. Ang pagdugang sa 10 mM MgSO₄ ug CuSO₄ nagdugang sa kalihokan sa enzyme sa gibana-bana nga 21% ug 35%, matag usa. Sa dihang giproseso ngadto sa apple juice, ang enzyme mikunhod sa pH ug viscosity, samtang ang phenolic content mikunhod gamay ra atol sa pagtipig.
Ang mga resulta nagpamatuod sa potensyal sa laccase sa industriya sa pagkaon, ilabina sa pagklaro sa ilimnon. Pinaagi sa pagbungkag sa mga phenolic compound, ang laccase dili lamang makapakunhod sa turbidity ug makapauswag sa katin-aw apan makapadayon usab sa kalidad sa mga duga sa prutas ubos sa malumo nga mga kondisyon sa operasyon. Dili sama sa tradisyonal nga mga clarifying agent sama sa gelatin, bentonite, ug silica gel, ang laccase dili makamugna og basura o makatangtang sa maayong mga kahumot gikan sa mga ilimnon, nga naghimo niini nga mas mahigalaon sa kalikopan ug malungtaron nga kapilian. Dugang pa, kon itandi sa ubang mga enzyme ug mga pamaagi sa pagsala, ang laccase nagtanyag og usa ka gitumong ug epektibo sa gasto nga solusyon nga wala ikompromiso ang kalidad sa produkto.
Kyomuhimbo, HD ug Brink, HG. Mga aplikasyon ug mga estratehiya sa immobilisasyon sa mga laccase nga adunay tumbaga; usa ka pagrepaso. Heliyon 9, e13156 (2023).